Proteintech  PF00004  CCK-8試劑盒

Proteintech CCK-8試劑盒-常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號：PF00004

產(chǎn)品名稱：CCK-8試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：500T

產(chǎn)品簡介：

Cell Counting kit-8 簡稱 CCK8(或WST-8)試劑盒，是一種基于 WST-8（化學(xué)名：2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2，4- 二磺基苯）-2H- 四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品說明：

WST-8工作原理：在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在 450 nm 波長處測定 OD 值，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。

WST-8 是 MTT 的一種升級替代產(chǎn)品，和 MTT 或其它 MTT 類似產(chǎn)品如 XTT、MTS 等相比有明顯的優(yōu)點。首先，MTT 被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的 formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而 WST-8 和 XTT、MTS 產(chǎn)生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，WST-8 產(chǎn)生的 formazan 比 XTT 和 MTS 產(chǎn)生的 formazan 相比更易溶解。再次，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加穩(wěn)定，使實驗結(jié)果更加穩(wěn)定。另外，WST-8 和 MTT 、XTT 等相比線性范圍更寬，靈敏度更高。CCK-8 法應(yīng)用非常廣泛，如藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。

保存條件

4℃避光保存1年有效，-20℃避光保存2年有效。

使用方法

1.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（測定細(xì)胞具體數(shù)量時）

1）先用細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。

2）按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細(xì)胞濃度梯度，一般要做 3-5 個細(xì)胞濃度梯度，每組 3-6 個復(fù)孔。

3）接種后培養(yǎng) 2-4 h 使細(xì)胞貼壁，然后加 CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時間后測定 OD 值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)線可以測定未知樣品的細(xì)胞數(shù)量（使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提條件是實驗條件一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入 CCK-8 后的培養(yǎng)時間）。

2.細(xì)胞活性檢測

1）在 96 孔板中接種細(xì)胞懸液（100 uL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37 ℃, 5% CO2 ）。

2）向每孔加入 10 uL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡， 它們會影響 OD 值的讀數(shù)）。

3）將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 h。

4）用酶標(biāo)儀測定在 450 nm 處的吸光度。

5）若暫時不測定 OD 值，可以向每孔中加入 10 uL 0.1 M 的HCl溶液或者1% w/v SDS 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24 h 內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。

3.細(xì)胞增殖毒性檢測

1）在 96 孔板中配置 100 uL的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 h （37 ℃，5% CO2 ）。

2）向培養(yǎng)板加入 1-10 uL 不同濃度的待測物質(zhì)。

3）將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間（例如：6、12、24 或 48 h）。

4）向每孔加入 10 uL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數(shù)）。

5）將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 h。

6）用酶標(biāo)儀測定在 450 nm 處的吸光度。

7）若暫時不測定 OD 值，可以向每孔中加入 10 uL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24 h 內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。

注：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性，可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。若藥物影響比較小，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。

注意

1.第一次做實驗時，建議先做幾個孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入 CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時間。

2.接種時注意細(xì)胞懸液一定要混勻，以避免細(xì)胞沉淀下來，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不一致。

3.培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā)，為減少誤差，建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基。

4.建議采用多通道移液器，減少平行孔間的誤差，加 CCK-8 時，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，若插到培養(yǎng)基液面下加，容易產(chǎn)生氣泡， 干擾 OD 值。

5.若細(xì)胞培養(yǎng)時間較長，培養(yǎng)基顏色或 pH 發(fā)生變化，建議更換培養(yǎng)基后再加 CCK-8，含有酚紅的培養(yǎng)基不影響測定。

6.CCK-8 對細(xì)胞的毒性非常低，其他的實驗，例如中性紅法或結(jié)晶紫法 ，也可在 CCK-8 法檢測完后繼續(xù)進(jìn)行。

7.可以使用大于 600 nm 的波長，例如 650 nm ，作為參考波長進(jìn)行雙波長測定，CCK-8 在參考波長處沒有吸光值，設(shè)定參考波長的目的是為了去除由于樣品渾濁所帶來的吸收。

8.如果實驗中待測物質(zhì)有氧化還原劑，在不含細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入藥物，然后加入 CCK-8 試劑在一定時間內(nèi)檢測，和不加藥物的培養(yǎng)基進(jìn)行比較（只加 CCK-8 試劑），如果 OD 值明顯偏高，則說明有反應(yīng)。

9.加 CCK-8 試劑時速度要快，減少試劑在移液器上的殘留，加入 CCK-8 試劑后輕震培養(yǎng)板，為了避免加樣時由于 CCK-8 殘留在槍頭上所帶來的誤差，可以在加樣前用培養(yǎng)基稀釋 CCK-8 試劑并混勻后加樣。

10.CCK-8 反復(fù)凍融會增加背景值，干擾實驗測定。

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產(chǎn)品訂購信息

PF00004  CCK-8試劑盒  500T

PF00008 動物活細(xì)胞和死細(xì)胞的活力/細(xì)胞毒性檢測試劑盒(鈣黃綠素AM，EthD-1方法） 300T