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土壤幾丁質酶(Soil Chitinase,S-Chitinase)試劑盒說明書

更新時間:2025-03-12      瀏覽次數:357


土壤幾丁質酶(Soil ChitinaseS-Chitinase試劑盒說明書

分光光度法 50 /24 

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:

幾丁質主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動物的外殼與軟體動物的器官(例如烏賊的軟骨),以及真菌類的細胞壁中,而幾丁質酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質水解,具有抵御真菌侵染的作用,成為抗真菌病害的研究熱點。

測定原理:

幾丁質酶水解幾丁質產生N-乙酰氨基葡萄糖,進一步與對二甲氨基苯甲醛產生紅色化合物,在 585nm處有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了幾丁質酶的活性。

試劑組成和配制:

 

產品名稱

BO6058-50T/24S

Storage

試劑一:液體

10ml

4℃

試劑二:液體

4ml

4℃

試劑三:液體

50ml

4℃避光

說明書

一份

自備儀器和用品:

天平、水浴鍋、離心機、震蕩儀、可見分光光度計、1 ml 玻璃比色皿,甲苯、蒸餾水。

樣品理:

新鮮土樣風干,過 30-50 目篩。

測定操作表:

 



對照管

測定管



土樣g

0.2

0.2



甲苯μl

30

30



混勻,25℃靜置 15min



蒸餾水μl

200




試劑一μl


200



混勻,37℃培養 24h



蒸餾水μl

400

400


4000rpm4℃,離心 10min,取上清 300μl 于新的EP 管中

試劑二μl

30

30

混勻,沸水浴 5min

試劑三μl

900

900

混勻,37℃顯色 20min,取 1ml  1ml 玻璃比色皿中,蒸餾水調零,測定 585nm 處吸光

值,記為A 對照管和A 測定管,ΔA=A 測定管-A 對照管。

 

計算公式:

標準曲線:y=5.2714x-0.0007R2=0.9989x 為標準品濃度(mg/ml),y 為吸光值ΔA

酶活性定義:37℃條件下,每克土壤每天分解幾丁質產生 1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。

土壤幾丁質酶活性(μg/d/g 土樣)=ΔA +0.0007÷5.2714×V 反總÷W÷T×1000= 598×ΔA +0.0007 V 反總:反應體系總體積,0.63mlW:樣本質量,0.2gT:反應時間,1d10001mg/ml=1000μg/ml

注意事項:

試劑一充分混勻后再使用。


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